高效液相色谱

HPLC，是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

高效液相色谱的特点：

高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。

　　高速——流速为0.1～10.0 mL/min。

　　高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

　　高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

　　速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

　　分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

　　灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

　　色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

　　样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

　　变性高效液相色谱技术(DHPLC)在医学基因检测中的应用．

DHPLC基因诊断癌症相关基因：

筛查癌症易感基因；

DHPLC法测定甲基化；

反映整个片段的CpG甲基化状态；

适用于所有CpG 甲基化测定；

准确性，稳定性好；

能够定量；

同时能够获得靶序列点突变/SNP的信息；

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